精準每一峰”——安捷倫HPLC標準操作的流程

安捷倫HPLC使用過程詳解  

一、開機前準備  

流動相處理?  

根據(jù)樣品性質(zhì)選擇流動相（如甲醇-水、乙腈-緩沖鹽等），需使用HPLC級溶劑，水相需超純水或三天內(nèi)更換的娃哈哈純凈水。  

流動相需用0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣15-30分鐘以去除氣泡。  

溶劑瓶中加入10%異丙醇水溶液（用于在線沖洗泵頭），防止隔夜流動相損傷色譜柱。  

色譜柱安裝?  

選擇與樣品匹配的色譜柱（如C18反相柱），按箭頭方向連接至柱溫箱，確保管路無死體積。  

長期未使用的色譜柱需用高有機相（如95%甲醇）保存，避免純水導(dǎo)致柱效下降。  

系統(tǒng)檢查?  

確認廢液瓶容量充足，洗針液（甲醇/乙腈）充足，管路無泄漏或堵塞。  

二、開機與系統(tǒng)平衡  

設(shè)備啟動?  

依次開啟四元泵→進樣器→柱溫箱→檢測器電源，待自檢完成后進入化學(xué)工作站。  

雙擊“Instrument1Online”圖標聯(lián)機，設(shè)置泵流速為5mL/min，切換溶劑通道排空氣泡（壓力＞10bar需更換排氣閥過濾白頭）。  

系統(tǒng)平衡?  

以梯度程序（如甲醇比例從0%升至10%）或等度程序（如95%甲醇）沖洗系統(tǒng)30分鐘，基線平穩(wěn)后記錄壓力值。  

梯度洗脫時需設(shè)置時間表，避免鹽溶液與有機溶劑直接混合導(dǎo)致沉淀。  

三、安捷倫HPLC方法編輯與運行  

方法創(chuàng)建?  

在化學(xué)工作站中新建方法，設(shè)置泵參數(shù)（流速、梯度）、柱溫（默認30-40℃）、檢測器波長（如254nm）及信號采集時間。  

積分參數(shù)需根據(jù)峰形調(diào)整斜率靈敏度、峰寬等，保存方法后調(diào)用至序列模板。  

樣品運行?  

單針運行：選擇樣品瓶位置，填寫樣品名稱，設(shè)置進樣體積（如10μL），啟動分析。  

序列運行：批量導(dǎo)入樣品信息，設(shè)置自動洗針功能，避免殘留污染。  

四、數(shù)據(jù)采集與分析  

數(shù)據(jù)優(yōu)化?  

調(diào)整信號范圍（自動量程或自定義），優(yōu)化基線噪聲，使用積分事件處理復(fù)雜峰形。  

校正表功能支持自動計算峰面積百分比或外標法定量。  

報告生成?  

選擇報告模板（簡單/完整），導(dǎo)出PDF或Excel格式，支持自定義注釋和色譜圖標注。  

五、關(guān)機與維護  

系統(tǒng)沖洗?  

分析結(jié)束后，用95%水沖洗30分鐘，再以100%有機相（甲醇/乙腈）沖洗20分鐘，保護色譜柱。  

含緩沖鹽的流動相需額外用純水沖洗45分鐘以上，防止鹽結(jié)晶堵塞管路。  

儀器維護?  

每日檢查泵頭密封圈（推薦聚四氟乙烯材質(zhì)），每月更換Seal-wash溶劑。  

長期停用時，色譜柱需密封保存于高有機相中，避免純水環(huán)境。